Выведение дезоморфина из организма, анализ.

[Фит]

При проведении экспертных исследований изъятых образцов, содержащих Д, возникают определенные сложности. Прежде всего, это связано с недостатком информации по особенностям химического анализа данного средства. В отечественной и зарубежной специальной литературе практически нет статей по исследованию Д. Отсутствуют и стандартные образцы этого вещества. В доступной нам литературе не описаны возможные побочные продукты превращения К до Д при различных условиях синтеза. Как показала практика, в регионах Д синтезируются в разных условиях (по различным методикам). Поэтому получающиеся образцы значительно отличаются по содержанию Д, а также по составу сопутствующих продуктов реакции.
Экспертные образцы промывали водой, подкисленной до рН - 2 0,1 н. раствором соляной кислоты. Полученные смывы центрифугировали, подщелачивали гидрокарбонатом натрия до рН 8 и экстрагировали смесью хлороформ-изопропанол (9:1) Органическую фазу испаряли, сухой остаток растворяли в 200 мкл смеси хлороформ-изопропанол (9:1) и полученные экстракты исследовали методами тонкослойной хроматографии (ТСХ) и ГХ-МС, в описанных выше условиях.
Отбор мочи для обнаружения наркотических средств и лекарственных веществ проводили согласно методике, описанной в Приказе МЗ РФ от 5 октября 1998 г. N 289 [4].
3 мл мочи, подщелачивали гидрокарбонатом натрия до рН 8 и экстрагировали смесью хлороформ-изопропанол (9:1). Органическую фазу испаряли, сухой остаток растворяли в 200 мкл смеси хлороформ-изопропанол (9:1), полученные экстракты исследовали методами ТСХ и ГХ-МС.
Гидролиз образцов мочи и изолирование наркотических средств группы опия проводили с использованием внутреннего стандарта – налтрексона [5].
Дериватизация образцов:
1) К упаренному досуха экстракту добавляли 100 мкл BSTFA, выдерживали 30 мин. при 55 оС для получения ТМС- производных. Пробу выпаривали досуха и остаток растворяли 50 мкл этилацетата.
2) К упаренному досуха экстракту добавляли 100 мкл MBTFA или TFAA, выдерживали 1 час при 70 оС для получения ТФА-производных. Пробу выпаривали досуха и остаток растворяли 50 мкл этилацетата.
Таблица 1. Вещества, которые идентифицированы, как синтетические аналоги К, обнаруженные в экстрактах из экспертных образцов.
Химическое название
Cas №
Структурная формула
Химическое название
Cas №
Структурная формула
Methyldesomorphine
16008-36-9

Desomorphine
427-00-9

Характерные ионы
Характерные ионы
283
160
42
268
226
271
270
214
148
272
Dihydromorphine, 3,6-dideoxy-
69663-
72-5

Morphinan-4,5-epoxy-3-ol
29096-51
-3

Характерные ионы
Характерные ионы
255
42
254
256
198
257
214
45
256
258

Результаты исследования
Для определения компонентного состава образцов, содержащих Д, экстракты образцов исследовали методом ГХ-МС, идентифицировали все соединения, которые, предположительно, могут являться синтетическими аналогами кодеина, и определяли их относительную концентрацию. Результаты исследования представлены в таблицах №1 и 2.
В таблице №1 представлены идентифицированные методом ГХ-МС основные производные К, обнаруженные в экспертных образцах и образцах мочи. В исследуемых объектах были обнаружены также кофеин, димедрол, анальгин и его продукты разложения, фенобарбитал. Практически во всех образцах, кроме выше перечисленных веществ, на хроматограммах был обнаружен пик вещества, масс-спектр которого представлен на рисунке 1, предварительно обозначенного, как вещество 1.
В таблице №2 представлены производные К, обнаруженные в исследуемых образцах. Концентрацию идентифицированных компонентов определяли методом внутренней нормализации, где все пики хроматограммы принимали за 100%.
Как видно из таблицы №1, исследуемые вещества в различных образцах значительно отличались по составу и взаимному соотношению компонентов. Это связано с особенностями проведения синтеза, его стадиями, способом подготовки наркотического средства для употребления, очистки продуктов. В частности, в образце №2 количество вещества 1 значительно превышает Д и К. Концентрация Д в экстрактах образцов мочи варьируется от 70-80 % до следовых количеств.
Таблица №2. Концентрации идентифицированных веществ в экспертных образцах и образцах мочи.
Образец
Вещество
Концентра-
ция
Образец
Вещество
Концентра-
ция
Экспертный
образец №1
Dihydromorphine, 3,6-dideoxy-
5.19
Экспертный
образец №4
Dihydromorphine, 3,6-dideoxy-
15,14
Methyldesomorphine
33.79
Morphinan-4,5-epoxy-3-ol
62,75
Desomorphine
29.58
Вещество 1
2,28
Вещество 1
29.67
Desomorphine
19,12
Codeine
1.759
Codeine
0,710
Экспертный
образец №2
Desomorphine
8,130
Экстракт мочи№1
Desomorphine
75,62
Вещество 1
76,215
Dihydromorphine, 3,6-dideoxy-
24,37
Codeine
15,655
Экспертный
образец №3
Methyldesomorphine
20.84
Экстракт мочи №2
Desomorphine
следы*
Desomorphine
11.83
Вещество 1
65.23
Вещество 1
55,94
Codeine
2.09
Codeine
44,05
** В экстракте мочи№2 дезоморфин идентифицировался только по спец. ионами
При исследовании образцов мочи кроме Д обнаруживаются также его производные в разных концентрациях. Это свидетельствует о том, что часть этих компонентов, попадающих в организм с Д, выводятся в неизменном виде. Д и другие продукты превращения К идентифицируются в пробах мочи как после кислотного гидролиза, так и без гидролиза. На хроматограммах экстракта мочи, содержащего большие количества анальгина, пик анальгина маскирует пик Д. В таких случаях идентификацию Д лучше проводить в солянокислых гидролизатах образцов, где мешающее влияние анальгина снижается.
Так как вещество 1 встречается во многих образцах, содержащих Д мы предположили, что данное вещество является его производным. На рисунке 2 представлена хроматограмма экстракта образца в режиме 2, где пик вещества с временем удерживания 7,49 мин идентифицирован, как Д, 7,53 –вещество-1.
Структуру вещества-1 идентифицировали методом структурно-спектральных корреляций, основываясь на известных масс-спектрометрических распадах Д и его аналогов.
Как известно, молекулярный ион m/z 271 является основным ионом масс-спектра Д. Ион m/z 256 – [M-15]+ соответствует потере метильной группы, ион m/z 254 - [M-17]+ характерен для потери гидроксигруппы, ион m/z 242 - [M-29]+ - возможная потеря частицы – С2Н5 с разрывом одного из ненасыщенных колец молекулы, m/z 228 - [M-43] + - потеря частицы - С2Н6N, m/z 214 - [M-57]+ - потеря фрагмента - С4Н9, что может соответствовать потере метильной группы и частицы - С3Н7 с разрывом двух связей в положениях 5-6 и 8-14 молекулы дезоморфина.
Если предположить, что основное направление фрагментации вещества 1 такое же, как Д, то можно провести следующую трактовку масс-спектра этого вещества (масс спектр представлен на рис.1): m/z 269 – молекулярный ион, который отличается от Д на 2 а.е.м., это позволяет предположить наличие одной двойной связи в молекуле вещества 1 больше чем в Д m/z 254 – [M-15] + соответствует потере метильной группы, m/z 252 [M-17] + - потеря гидроксигруппы, m/z 240 - [M-29] + - возможная потеря частицы – С2Н5 с разрывом одного из ненасыщенных колец молекулы, m/z 226 - [M-43] +- потеря частицы -С2Н6N, m/z 212 - [M-57] +- потеря фрагмента - С4Н9, что может соответствовать потере метильной группы и частицы - С3Н7 с разрывом двух связей в положениях 5-6 и 8-14.
Исследуемое вещество имеет характер распада сходный с дезоморфином. При фрагментации наблюдается деструкция двух ненасыщенных колец, одно из которых содержит азот, и другого, где наблюдается разрыв двух противоположных связей, возможно, в положениях 5-6 и 8-14. Поскольку все фрагменты исследуемого вещества отличаются от фрагментов масс-спектра дезоморфина на 2 а.е.м., можно предположить, что двойная связь локализуется в том насыщенном кольце, которое не деструктирует при распаде. Идентифицированное вещество можно представить, как дегидродезоморфин.
Так как многие методики исследования наркотических средств методом ГХ-МС при криминалистических исследованиях и исследованиях в биоматериале используют дериватизацию веществ, исследование ТФА и МТС производных Д и сопутствующих ему веществ представляет большой практический интерес. В доступной литературе информацию об интересующих нас производных мы не обнаружили. Кроме того, получение ТФА- производного идентифицированного дегидродезоморфина и исследование его масс - спектра может подтвердить структуру исследуемого вещества.
При дериватизации (с BSTFA) дезоморфина в экстракте мочи, получен пик с временим удерживания 18.897 мин, хроматограмма (в режиме 1) и масс-спектр представленны на рис. 3 и 4.
Молекулярная масса ТМС-производного Д (ТМС-Д) равна 343 а.е.м., следовательно, молекулярному иону соответствует m/z 343, ион m/z 328 – [M-15]+ соответствует потере метильной группы, ион m/z 314 - [M-29]+ - возможная потеря частицы – С2Н5 с разрывом одного из ненасыщенных колец, m/z 300 - [M-43]+ - потеря частицы -С2Н3N, m/z 286 - [M-57]+ - потеря фрагмента - С4Н9 , что может соответствовать потере метильной группы и частицы - С3Н7 с разрывом двух связей в положениях 5-6 и 8-14 насыщенного кольца, ион m/z 271 - [M-72]+ может соответствовать потере триметилсилильной группы.
По характеру распада это вещество может быть идентифицировано, как моно-триметилсилильное производное Д. В целом характер распада идентичен распаду Д. Ион, соответствующий отрыву гидроксигруппы [M-17]+ отсутствует, поскольку дериватизация происходит по гидроксигруппе и наблюдается ион [M-72]+, соответствующий потере триметилсилильной группы.
На рис. 5 и 6 представлены хроматограмма ТФА-производного дезоморфина и его масс-спектр. При проведении хроматографирования в режиме 1 пик ТФА- производного дезоморфина имел время удерживания 11,85 мин.
Молекулярный ион m/z 367 является основным в масс-спектре. Ион m/z 352 – [M-15]+ соответствует потере метильной группы, ион m/z 338 - [M-29]+- возможная потеря частицы – С2Н5 с разрывом одного из ненасыщенных колец молекулы, m/z 324 - [M-43]+- потеря частицы - С2Н6N, m/z 310 - [M-57]+ - потеря фрагмента - С4Н9 , что может соответствовать потере метильной группы и частицы - С3Н7 двух связей в положениях 5-6 и 8-14, m/z 270 - [M-97]+- потеря трифторацетильной группы. Так же, как и в моно-триметилсилильном производном Д, ион, соответствующий отрыву гидроксигруппы [M-17]+ отсутствует, поскольку дериватизация происходит по гидроксигруппе и наблюдается ион [M-97]+,соответствующий потере трифторацетильной группы. По характеру распада это вещество может быть идентифицировано, как моно-трифторацетильное производное дезоморфинна.
Для подтверждения структуры идентифицированного нами дегидродезоморфина исследовали продукт его дериватизации с MBTFA. Хроматограмма и спектраграмма вещества представлены на рис.7-8. Хроматограмма проведена в условиях режима 2, пик исследуемого вещества имеет время удерживания 6,98 мин.
ТФА производное дегидродезоморфина должно иметь молекулярный ион m/z 365, а также на спектрограмме имеются пики ионов, соответствующих: m/z 350 – [M-15]+ потере метильной группы, m/z336- [M-29]+ - возможно, потере частицы -С2Н5 с разрывом одного из ненасыщенных колец молекулы, m/z 322 - [M-43]+- потеря частицы - С2Н6N, m/z 268- [M-97]+ - потеря трифторацетильной группы.
Так же, как и у других ТФА-производных, ион, соответствующий отрыву гидроксигруппы [M-17]+ отсутствует, поскольку дериватизация протекает по гидроксигруппе и наблюдается ион [M-97]+ , соответствующий потере трифторацетильной группы. По характеру распада это вещество может быть идентифицировано как моно-трифторацетильное производное дегидродезоморфинна.
Таким образом, при исследовании методом ГХ-МС различных экспертных образцов был выявлен дезоморфин. Впервые методом ГХ-МС были идентифицированы дегидродезоморфин, моно-трифторацетильное производное дегидродезоморфинна, а также моно-трифторацетильное производное дезоморфинна и моно-триметилсилильное производное дезоморфина.{mospagebreak title= исследование дегидродезоморфина методов ВЭЖХ }
Перед исследованием Д и дегидродезоморфина методов ВЭЖХ необходимо было выделить данные вещества, для чего применяли очистку веществ методом ТСХ. Использовали систему растворителей бензол- этанол - диэтиламин (9:1:1), как наиболее часто используемую при анализе наркотических средств группы опия. При ТСХ-исследовании экспертного образца, содержащего Д, при проявлении реактивом Марки на пластинке наблюдали 2 пятна: слабо заметное сине-фиолетовое пятно на уровне кодеина (пятно 1 с Rf=0.46 ) и сине-фиолетовое - в зоне между кодеином и диацетилморфином - зона, соответствующая дезоморфину (пятно 2 c Rf=0.63 ). С ТСХ-пластинки на уровне проявленных зон вещества элюировали смесью хлороформ-изопропанол (9:1). Часть полученных экстрактов исследовали методом ГХ-МС, результаты представлены в таблице 3. Концентрацию идентифицированных компонентов определяли методом внутренней нормализации, где все идентифицированные пики принимали за 100%.
Таким образом, в экспертном объекте вещества, проявленные реактивом Марки, выявлены в 2-ух зонах. В первой зоне на уровне кодеина обнаружены, предположительно: дегидродезоморфин и кодеин, причем в примерно одинаковых количествах. Во второй зоне на уровне Д выявлены, предположительно, дегидродезоморфин и Д, где количество Д примерно 3 в раза меньше, чем дегидродезоморфина. В этой зоне идентифицируется также анальгин. Таким образом, в данных условиях на ТСХ- пластинках происходит неполное разделение Д от других синтетических аналогов. Используемая при анализе наркотических средств система растворителей бензол- этанол - диэтиламин (9:1:1) недостаточно информативна, поэтому необходимо применение других методов для подтверждения наличия Д в исследуемых образцах.
Таблица №3. Концентрации идентифицированных веществ в образцах, очищенных методом ТСХ.
Образец
Вещество
Концентра-
ция
Образец
Вещество
Концентра-
ция
Пятно 1 на уровне кодеина (c Rf=0.46)
дегидродезоморфин
56,761
Пятно 2 на уровне дезоморфина (c Rf=0.63)
дегидродезоморфин
86,229
Desomorphine
1,197
Desomorphine
13,771
Codeine
42,042
Очищенные образцы исследовали на жидкостном хроматографе в режиме, описанном [3]. Для этого полученные экстракты после ТСХ-очистки реэкстрагировали 200 мкл смеси 4M LiCLO4-0.1M HCLO4:Н2О (95:5) и исследовали на хроматографе.
Таблиц 4. Результаты обработки хроматограмм пятен на уровне кодеина и дезоморфина
№
Пика
Объем удержи-вания
(µL)
Пло-щадь
пика
(AU*µL)
Спектральные отношения
Название
220nm
230nm
240nm
250nm
260nm
280nm
300nm
Результаты обработки хроматограммы пятна 1 на уровне кодеина
3
881.96
15.304
0.708
0.615
0.695
0.710
0.787
0.349
0.016
Анальгин
5
1018.22
8.293
0.352
0.191
0.111
0.036
0.017
0.050
0.002
дегидродезоморфин
6
1033.74
8.567
0.674
0.241
0.201
0.128
0.042
0.072
0.008
Codeine
Результаты обработки хроматограммы пятна 2 на уровне дезоморфина
4
1015.34
55.027
0.363
0.197
0.115
0.039
0.017
0.050
0.002
дегидродезоморфин
5
1146.40
10.893
0.251
0.164
0.081
-0.001
0.005
0.040
0.000
Desomorphine
Таким образом, при исследовании методом ГХ-МС различных экспертных образцов, содержащих Д, были выявлены 4 компонента по масс-спектрам идентифицированные, как синтетические аналоги Д. При этом доля Д составляла от следовых количеств до 70-80% от всех пиков. Следовательно, при обнаружении этих соединении, можно предположить, что исследуемый образец - это продукт синтеза Д. Синтезированы и исследованы ТФА и ТМС аналоги Д. В образцах идентифицирован дегидродезоморфин, представлены масс-спектры этого вещества и его ТФА-производного.
Исследованы экспертные образцы мочи, содержащие Д. Показано, что Д может быть как основным компонентом, так и в качестве микропримесей. В образцах мочи идентифицировались некоторые синтетические аналоги Д. Это свидетельствует о том, что часть данных веществ выводятся с мочой в неизменном виде. Д обнаруживается в моче, как при щелочной экстракции, так и после солянокислого гидролиза.
Методом ТСХ- очистки выделен и впервые исследован Д на жидкостном хроматографе «Милихром А-02». Определены время выхода и спектральные отношения дегидродезоморфина и Д в условиях режима хроматографа ДБ-2003.
Предлагаемая работа позволяет провести комплексное исследование экспертных образцов и биологических жидкостей, содержащих Д, повышает качество проведения экспертиз и исследований, связанных с незаконным оборотом наркотических средств.
Выборочно стырино с http://analittox.ru/index.php?option=co ... mitstart=4

[Фит]

http://www.forenschemist.narod.ru/Stat/Deso.htm
Также материалы по теме.