Введение
В англоязычной литературе этот тест упоминается как The Meixner's test - реакция окрашивания препарата гриба содержащего альфа-аманитин. Изначально разработанный для определения аматоксинов, этот тест, к сожалению (а может и к счастью), дает 100% ложных срабатываний на псилоцин\псилоцибин (и вобще 5-замещенные триптамины). С другой стороны его плюсом является предельная простота и возможность использования в полевых условиях. Весьма маловероятно, что в исследуемом вами грибе будут содержаться аманитины и псилоцин одновременно, поэтому тест считается вполне надежным. По крайней мере известно , что этим тестом пользуются медики и спасатели в экстренных случаях что косвенно указывает на его надежность.
К сожалению данной реакцией нельзя пользоваться для отделения представителей Galerina spp. от Psilocybe spp. по указанной выше причине неселективности теста. Однако именно Galerina spp. может быть ошибочно принята за Psilocybe spp. из-за совместных ареалов обитания и похожей окраски\внешнего вида.
Для теста на аманитины используют их цветную реакцию с комплексным биополимером лигнином содержащимся в газетной бумаге1. Вобще лигнин - это побочный продукт при получении целлюлозы, и от него избавляются при производстве более-менее качественной бумаги. Но на производство газетной бумаги, понятное дело, никто не разоряется (подозреваю, что на производство дешевой туалетной - тоже), и от лигнина сырье никто не очищает. Это как раз то, что нам нужно - дешевая газетная бумага самого низкого качества.
Минимальные количества вещества определяемые тестом
Cо 100% вероятностью (5 человек из 5, в серии из 10 испытаний считали, что они нашли альфа-аманитин):
- альфа-аманитин: 2мкг
- псилоцин\псилоцибин\: 2мкл неочищенного экстракта грибов
C вероятностью 35% (1-2 человека из 5 в серии из 10 испытаний считали, что они нашли альфа-аманитин)
- 5-гидроокситриптами: 100мкг
- 5-метокси-N,N-диметилтриптамин: 100мкг
Ложные срабатывания
Имеются. Реагирует на: псилоцин, псилоцибин, 5-замещенные триптамины (в частности 5-гидроокситриптами, 5-метокси-N,N-диметилтриптамин).
Для проведения теста потребуется:
- Три полоски газетной бумаги (не глянцевой) на которых ничего не напечатано (поля газеты, например)
- Концентрированная соляная кислота
- Стеклянная пипетка
- Кусочек шляпки свежего2 гриба содержащего аманитины (например бледную или белую поганку, мухомор вонючий, токсичных представителей Lepiota или Galerina). Необходимо иметь стопроцентную уверенность в том, что гриб токсичен и содержит альфа-аманитин - если у вас мало опыта, проще будет найти бледную или белую поганку. Если у вас есть возможность купить тестовый препарат аманитина - это еще лучше. Такие препараты продают некоторые конторы для калибровки тестов на аманитины - Яndex про них многое знает. Этот кусочек гриба (или препарат аманитина) мы будем называть положительным свидетелем (несмотря на его отрицательную натуру)
- Кусочек шляпки свежего гриба НЕ содержащего аманитины (например сыроежку, подосиновик и т.п.). Как правило, там где растут аманиты так же можно найти грибы из семейства болетовых - в народе их называют одним именем: "белый гриб". Его сложно3 спутать с ядовитым из-за трубчатого гименофора и вобще внешнего вида. Этот кусочек гриба мы будем называть отрицательным свидетелем.
Для проведения теста крайне желательно (я бы даже сказал - обязательно) наличие положительного и отрицательного свидетеля. В противном случае результаты теста будут не верифицируемы, и ценность такого теста будет сомнительная - если только вы не решили просто попрактиковаться. Чисто технически, при наличии опыта, тест можно проводить и с одним из свидетелей или вовсе без них - все зависит от того, насколько важна достоверность и результаты теста. Так как тест этот изначально предназначался для проверки гипотез об отравлении а не для отделения съедобных грибов от несъедобных, то ответственность за возможные ошибки лежит на том, кто проводит тест.
Методика проведение теста
Шаг 1. Грибы аккуратно разминают (в ступке пестиком, в стакане ложкой, можно и пальцами, только руки нужно мыть после каждого гриба, чтобы во-первых не исказить результаты теста, а во-вторых потому что аманитины и фаллоидины токсичны при долгой экспозиции на коже) до выступания на них "сока". Если грибы изначально были сухими - их необходимо подвергнуть их регидрации 70% этиловым спиртом (см. прим. 2 в конце описания метода). Вполне вероятно, что вам захочется сохранить сухой экземпляр гриба с аматоксинами для использования его в будущем как положительного свидетеля - это вполне разумная идея, при правильной сушке и хранении, и именно для этого случая и нужна регидрация.
Шаг 2. На каждую из газетных полосок кладется кашица из одного гриба и слегка придавливается так, чтобы газета начала пропитываться "соком" гриба. Каждую полоску газеты следует подписать - необходимо записать название грибов\препаратов которые туда были помещены, поставить дату и время, указать дату ,время и место сбора образцов4. Полоска с препаратом тестируемого гриба подписывается как угодно - на ваше усмотрение. Желательно пользоваться латинскими названиями грибов, тогда вас поймут даже иностранцы и даже, если напишите с ошибками - латынь в микологии это своего рода эсперанто. Необходимо проследить за тем, чтобы чернила не попали в область пропитываемую грибом, иначе результаты теста будут неверными.
Полоску с положительным свидетелем мы будем называть положительной (+) полоской, а с отрицательным - отрицательной (-) полоской.
Шаг 3. Когда бумага достаточно пропитается и образуется жирное пятно, кашицу аккуратно удаляют а полоски высушивают при комнатной температуре в тени. Это обусловлено несколькими сообщениями о том, что при сушке на солнце а так же горячим феном препарат грибов разрушался.
Шаг 4. Аккуратно , пипеткой, берется немного соляной кислоты и наносится одна капля на то место полоски, где было пятно (наносить по одной капле нужно на все три полоски, не делая пауз между нанесениями), после чего бумажки оставляют на некоторое время - порядка 10-20 минут или более. Положительная полоска должна поменять свой цвет на сине-голубой с, возможно, примесью зеленого и зафиксировать его (перестать менять цвет).
Изменение окраски на синюю или голубую5 (возможно - с примесью зеленого) говорит о наличии аманитинов или псилоцина\псилоцибина6
Особое внимание следует обратить на то, что используется минимальное количество кислоты - это улучшает достоверность теста в тех случаях, когда необходимо обнаружить токсины при весьма низкой их концентрации или малом количестве исследуемого материала (в частности, при тестировании ядовитых Lepiota spp.), в то время как избыток кислоты может привести к отрицательному результату. В общем случае избыток кислоты ухудшает нижний предел тестирования7.
Шаг 5. Окраску препарата исследуемого гриба следует сравнить с окраской полосок-свидетелей. При этом одна из них (положительная) должна уверенно менять свой цветна синий\голубой, а другая (отрицательная) не должна окрашиваться в синий\голубой вовсе. Хотя допускается легкое изменение окраски у (-) полоски в сине-голубую сторону, но при этом изменение окраски должно быть крайне незначительным по сравнению с окраской (+) полоски. Если окраска свидетелей какая-либо иная, результаты теста считаются недостоверными и рекомендуется произвести тест по-новой.
По близости цвета полоски с препаратом исследуемого образца к цвету полосок-свидетелей делают выводы о наличии или отсутствии аманитинов (отсутствуют, присутствуют в большом или малом количестве)
На фотографии ниже можно видеть правильно сделанный тест. В качестве положительного свидетеля был использован ядовитый гриб из рода Galerina (Галерина окаймленная), в качестве отрицательного - Russula crustosa (Cыроежка, незнаю как правильно, пусть будет "корообразная" или "шелушащаяся") Полоски подписаны, окрашивание отчетливое, подпись на большом расстоянии от пятен. Здесь, кстати, видно что капалось две капли в разные точки - это было сделано специально, для большей площади окрашивания.
Возможные ошибки и методы их избежать
- Есть окрашивание отрицательного свидетеля:
Избыток\недостача соляной кислоты - убедитесь в том , что кислота концентрированная. Наносите только одну каплю. - Сомнительная газетная бумага - нанесите контрольную каплю кислоты на чистую бумагу, убедитсеь в отсутствии окраски. Попробуйте взять другую газету.
- Наличие индолов и\или токсинов , которых там быть не доложно по определению - необходимо убедиться , что гриб не токсичен и хорошо вам известен. Чтоит попытаться найти другой гриб.
- Случайное загрязнение в процессе тестирования - при разминании пальцами следует мыть руки. Следует первым разминать отрицательного свидетеля, следом за ним - исследуемый образец, и лишь в конце - положительного свидетеля
- Нет окрашивания положительного свидетеля:
- Избыток\недостача соляной кислоты - убедитесь в том , что кислота концентрированная. Наносите только одну каплю.
- Гриб использованный для (+) полоски не является токсичным, возможно срок его хранения истек - придется искать новый токсичный гриб
- Нет окрашивания нигде:
- Проверить кислоту, используемую бумагу, грибы - вобщем, все что можно
1В российском интернете циркулирует информация о коричном альдегиде , якобы содержащемся в газетной бумаге, выступающим как тест-агент (информация ,в частности, с сайта Руслана "Chemister'a" Кипера.) В известных мне описаниях этого теста (публикация самого Мейснера, несколько публикаций в те-же годы по верификации и улучшению теста) ни о каких альдегидах не говорилось - предлагалось брать газетную бумагу из-за ее впитывающей способности и высокого содержания лигнина.
2Возможно так-же использование и сухих грибов: при этом необходимо кусочек такого сухого гриба перед проведением теста регидрировать небольшим количеством 70% этилового спирта, подождав пока сухой материал хорошо пропитается спиртом. Термин "регидрация" тут, конечно, не к месту, т.к. никакой воды не используется, но другого мне в голову не приходит, а этот вполне хорошо отражает суть процесса. Спирт крайне желательно брать именно 70%, многочисленные отчеты по верификации теста Мейснера говорят что именно такая концентрация дает наиболее корректные результаты. Это экспериментально полученная информация, объяснять этот феномен никто не удосужился
3Однако можно спутать с т.н. "сатанинским грибом" (Boletus satanus), который отличается слегка розоватой окраской гименофора и противным горьким вкусом. Пробовать на вкус безопасно - гриб не является смертельно ядовитым
4Следовать рекомендациям о том что и как писать - на ваше усмотрение. Я описал как делают работники различных служб и микологи, не обязательно в точности повторять их действия. Если не планируется результаты теста передавать третьему лицу или хранить для последующего использования то можно и вовсе не подписывать; если же планируете хранить и\или передавать, то постарайтесь записать ключевую информацию - даже тупой карандаш обычно лучше самой острой памяти.
5Иногда, крайне редко, можно наблюдать окрашивание различными оттенками красного. Когда и почему это происходит - не ясно, однако этого никогда не происходит с Amanita или псилоцибино-содержащими видами. Здесь необходимо дальнейшее исследование, но я не располагаю соответствующими видами грибов. Следует не забывать делать "контроль" каплей кислоты просто на чистую бумагу - некоторые газеты могут дать окрашивание сами по себе по неизвестной причине.
6Мне не известно, дают ли подобное окрашивание другие индолы, например буфотенин из A. pantherina - здесь большой простор для экспериментов.
7См. комментарий Paul P. Vergeer в ответ на публикацию техники проведения теста Мейснера.
